Микробиота кишечника человека представляет собой сложную, динамичную систему, состоящую из множества групп микроорганизмов, которые взаимодействуют между собой и с организмом человека, выполняя ряд важных функций. Наиболее корректно оценивать микробиоту кишечника, рассматривая все группы микроорганизмов как компоненты одного целого. В исследование ЭНТЕРОФЛОР® Дети входят 43 показателя, соответствующие не менее 99,9% микробиоты кишечника детей.

Тест ЭНТЕРОФЛОР® Дети предназначен для диагностики дисбиотических нарушений кишечника, связанных с хроническими воспалительными процессами, длительными нарушениями пищеварения, приемом антибиотиков и т.д. При наличии у пациента симптомов ОКИ (рвота, диарея, боли в животе) в случаях, если возбудители ОКИ обнаружены не были, можно назначить исследование ЭНТЕРОФЛОР® Дети.

Алгоритм для формирования заключения разработан для детей до 14 лет. При исследовании образцов биоматериала пациентов более старшего возраста итоговая оценка состояния микробиоты кишечника может быть затруднена.

В основе анализа кала на дисбактериоз и исследования методом ПЦР лежат две разных технологии, поэтому результаты могут различаться.
Посев кала на дисбактериоз предполагает выявление определенного спектра бактерий и грибов в отличие от стандартного посева, при котором происходит культивирование широкого перечня микроорганизмов на различных питательных средах. В то же время исследование на дисбактериоз имеет ограничения, свойственные микробиологическому анализу в целом: 50-80% микроорганизмов, составляющих кишечную микробиоту, являются трудно культивируемыми, поэтому не выявляются микробиологическим методом. Результаты посева напрямую зависят от сохранения жизнеспособности микроорганизмов, то есть от продолжительности интервала между взятием биоматериала и его поступлением в лабораторию, соблюдения условий хранения и транспортировки образца.
В исследовании ЭНТЕРОФЛОР® Дети используется прямой метод диагностики микроорганизмов по фрагментам ДНК, который не требует сохранения жизнеспособности микроорганизмов.

Привычные нормы анализа на дисбактериоз были разработаны для выполнения микробиологического исследования кала с учетом его ограничений и были определены только для двух групп детей: дети до года и дети старше 1 года. Использование принципиального новой технологии анализа ДНК методом ПЦР в реальном времени позволило расширить перечень выявляемых показателей и определить значения нормы для более узких возрастных интервалов. Более подробно о разнице технологий – в ответе на предыдущий вопрос.

В исследовании ЭНТЕРОФЛОР® Дети определяется ген устойчивости Staphylococcus spp. к метициллину – mecA. Для выявления более широкого спектра генов антибиотикорезистентности методом ПЦР мы рекомендуем использовать исследование «БакРезиста GLA». Альтернативный вариант – назначение посева кала на дисбактериоз с оценкой антибиотикочувствительности и исследования ЭНТЕРОФЛОР® Дети из одного образца.

Состояние нормобиоза отражает динамичное равновесие между компонентами микробиоты (с преобладанием представителей нормобиоты). Возможные отклонения от нормы отдельных представителей нормобиоты в ту или иную сторону могут взаимно компенсироваться. Это связано с функциональной избыточностью микробиоты: ряд функций может выполняться представителями разных групп микроорганизмов. Например, в утилизации крахмала могут принимать участие как бифидобактерии, так и некоторые бактероиды.

Трактовать результаты выявления маркеров патогенности и резистентности в количестве, превышающем пороговое значение, следует с учётом клинической картины у конкретного пациента, особенно в случаях нарушения нормобиоза кишечника.
Streptococcus agalactiae не представляет угрозы здоровью ребёнка, однако способность этого стрептококка к проникновению в клетки человека и потенциально индукции энцефалита у новорожденных ассоциирована с наличием маркера инвазивности srr2.
Стафилококки, в том числе и метициллинрезистентные (mecA+) штаммы, в количестве, не превышающем порогового значения, часто являются нормальными компонентами кишечного микробиома. При дисбиозе заселение кишечника антибиотикоустойчивыми микроорганизмами становится более вероятным. В этом случае возможная неизбирательная антибиотикотерапия по любому другому поводу может привести к появлению мультирезистентного штамма стафилококка, увеличению его количества, снижению барьерной функции кишечной микробиоты, приводящей, например, к таким осложнениям, как сепсис.
Носительство токсигенного и нетоксигенного штамма C.difficile для детей возрастом до 2 лет является вариантом нормы и не представляет угрозы здоровью ребёнка, предположительно, благодаря отсутствию рецепторов для токсина у детских энтероцитов. По мере созревания иммунной системы ребёнка C.difficile в норме вытесняется из состава кишечной микробиоты примерно к 2 годам жизни. У детей старшего возраста в норме токсигенный штамм C.difficile присутствовать не должен.

В норме филум Firmicutes, куда входит огромное количество бактерий, в том числе составляющих нормобиоту человека, преобладает над филумом Bacteroidetes. Но соотношение Firmicutes/Bacteroidetes снижается при воспалительных заболеваниях кишечника, таких как язвенный колит, болезнь Крона и других.

Определение маркеров воспаления кишечника в исследовании не предусмотрено, но снижение coотношения Firmicutes/Bacteroidetes косвенно свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса в кишечнике.

Образцы кала или мекония допускается транспортировать и хранить:

• при комнатной температуре (от 18 °С до 25 °С) – не более 6 часов
• при температуре от 2 °С до 8 °С – не более 3 суток

Хранение в виде суспензии с глицерином:

• при температуре минус 20 °С – в течение 1 недели
• при температуре минус 70 °С – длительно

Результат исследования ЭНТЕРОФЛОР® Дети выражен десятичным логарифмом количества геном-эквивалентов каждой группы или отдельных микроорганизмов в 1 грамме кала. Например, значение 9,3 Lg(ГЭ/г) – это 10^9,3 ГЭ/г.
Результат микробиологического исследования традиционно выражен в КОЕ/г, например, 10^8 КОЕ/г.
Результаты микробиологического и молекулярно-генетического исследований могут различаться, причины несовпадений описаны в ответе на вопрос «Можно ли сравнивать результаты ЭНТЕРОФЛОР® Дети с микробиологическим анализом на дисбактериоз, будут ли совпадать результаты?»

Метаболически активные «детские» виды бифидобактерий способствуют закреплению в биоценозе и размножению лактобацилл, а также активации клеточного иммунитета и лимфоцитов, имеющих противовоспалительное действие. Для детей 1–2 года жизни оценивается доля метаболически активных «детских» видов бифидобактерий, отмечается возможное снижение этой группы микроорганизмов. Также отмечаются случаи возможного преобладания метаболически активных «взрослых» видов бифидобактерий, способствующих активации гуморального звена иммунитета и провоспалительного Т17 и создающих возможность для сенсибилизации организма.
Для детей 1–2 года жизни отдельно анализируется разнообразие метаболически активных «детских» видов бифидобактерий, способствующих наиболее полному усвоению олигосахаридов грудного молока.

Бактерии класса Clostridia входят как в состав кишечной нормобиоты, так и в состав группы патобионтов. Например, группа бактерий Clostridium leptum может составлять до 60% от всей кишечной микробиоты, являясь одним из ведущих представителей нормобиоты, который обеспечивает клетки кишечника энергией и синтезирует полезные для организма человека вещества, например, витамины и незаменимые аминокислоты.
В то же время, бактерии групп Clostridium difficile и Clostridium perfringens являются представителями условно-патогенной микробиоты и способны вызывать дисбиотические состояния.
В бактериологическом исследовании обычно определяется только вид Clostridioides difficile, как потенциально токсигенный. Остальные клостридии не определяются при стандартном бакпосеве.

Это абсолютный патоген, который входит в состав исследования для диагностики ОКИ.

Бактерии родов Eubacterium и Butyrivibrio определяются в составе семейства Lachnospiraceae.

Да, информация о возрасте ребенка необходима для формирования корректного результата, поскольку состав микробиоты у детей разного возраста различается.

Разнообразие кишечной микробиоты увеличивается с возрастом, начиная с рождения. Например, у младенца в возрасте одного месяца нормальным считается разнообразие микробиоты больше 3. А к возрасту двух лет у малыша в норме разнообразие микробиоты должно быть не менее 10.
При введении прикорма – овощей и фруктов, молочных и безмолочных каш, мясного пюре, творога, яиц – разные группы бактерий участвуют в переработке компонентов пищи и, соответственно, начинают активно заселять кишечник. Различные представители нормобиоты также обладают разными механизмами подавления различных групп патобионтов. Таким образом, чем больше разнообразие, тем устойчивее биоценоз кишечника.